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Enzymatics促销第二弹!二代测序(NGS)相关产品

 

 二代DNA测序的工作流程如下:

  DNA样本制备;

  文库构建和验证;

  文库分子大规模平行克隆扩增。

 通常情况下,一个常规的DNA文库构建方案包含四步:

 片段化DNA;

 对DNA片段进行末端修复;

 连接适配子序列(不适用于单分子测序);

 对可选的文库进行扩增

片段化DNA之后,需要将DNA修复,产生5’磷酸化的平末端DNA,以便能够和测序平台特异性的适配子相连接。文库构建的效率直接依赖于DNA末端修复的效率和准确性。

末端修复混合溶液将5’或者3’的粘性末端转变成5’磷酸化的平末端DNA。在大多数情况下,末端修复通过T4 DNA聚合酶的5’—3’聚合酶活性和3’—5’的核酸外切酶活性完成。而T4多聚核苷酸激酶确保平末端的DNA片段5’端的磷酸化,以便进行后续的适配子连接。

根据所使用的测序平台,平末端DNA片段可以直接与适配子连接,或者需要在其片段的3’端增加一个单独的突出的腺苷酸A,以便与平台特异性适配子上突出的胸苷酸T相互配对。通常情况下,使用Klenow片段(具有最低的3’到5’端的核酸外切酶活性),或者使用其它具有末端转移酶活性的聚合酶催化这一步骤。

T4 DNA连接酶将双链的适配子与文库片段修复过的末端相连,然后使用回收反应或者根据DNA的尺寸,选择性去除文库中未连接的适配子和适配子二聚体。完成这一步骤之后,应该对DNA片段文库的质量进行检测,并进行定量检测。

根据浓度和测序文库的适配子设计,既可以直接稀释溶液并用于测序,也可以对文库进行选择性扩增。在文库扩增阶段,使用高保真的DNA聚合酶,合成完整的适配子序列,通过与PCR引物的重叠,用于后续的克隆扩增和与测序引物结合,或者提高DNA文库的产量。

 

订购信息:

品名 货号 规格 目录价 促销价
末端修复混合液(高浓度) Y9140-HC-L 75 Reactions 4610  2997 
Y9140-HC-F 20 Reactions 1822  1185 
末端原位转录酶(TdT) P7070L 6,000 U 4610  2997 
P7070F 900.00 U 1074  698 
T4 DNA 聚合酶 P7080L 2,000 U 4610  2997 
P7080F 310.00 U 1074  698 
Klenow (3′→ 5′ exo-)(高浓度) P7010-HC-L 10,000 U 4978  3235 
P7010-HC-F 1,540 U 1142  743 
末端原位转录酶(TdT) P7070L 6,000 U 4610  2997 
P7070F 900.00 U 1074  698 
T4 DNA连接酶(快速) L6030-HC-L 240,000 U 6514  4234 
L6030-HC-F 26000.00 U 1074  698 
VeraSeq™ 2.0高保真DNA 聚合酶 P7511L  500 U 4066  2643 
P7511F 100 U 1278  831 
2X VeraSeq™ PCR Mix  P7610L  250 Reactions 4338  2820 
P7610F 50 Reactions 1074  698 

 

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