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RPA(恒温扩增)技术应用于肿瘤基因检测

  RPA(恒温扩增)技术应用于肿瘤基因检测

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  肿瘤基因相关基因检测在癌症早期诊断中意义重大。目前的检测金标准为PCR和基因测序技术,而这些技术大多需要精密的仪器和复杂的试验流程,专业的实验人员配置。在现有的分子诊断技术中,以RPA为代表的核酸等温扩增技术以其快速,灵敏,无需仪器等特点,使突破以上壁垒成为可能。

  近日,大连医科大学刘元斌课题组发明一种无需任何仪器,实现快速检测突变基因并肉眼识别的新方法,被称为AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。该方法以RPA(重组酶聚合酶恒温扩增技术)为基础,加之PNA技术(肽核酸类似物),并利用SYBR Green I核酸染料法显色,肉眼即可判断核酸扩增与否。

  文章中,作者比较了在PCR,测序以及ARSP在非小细胞肺癌中EGFR突变检测应用,发现在非小细胞肺癌细胞系中,5分钟便能检测到EGFR 19Del(2)缺失突变,10分钟检测EGFRL SNP 突变,实现肉眼快速判断(图1),并在组织样本中同样得到验证(图2)。

  同样,10到20分钟之内成功检测到EGFR点突变。与传统的DNA测序方法相比较,ARPS有着许多优势之处,包括时间短,成本低,操作简单,无需精密仪器等,而且,在基因组DNA样本中,ARPS可以检测到30%和40%的靶向突变位点,灵敏度与测序相当(图3)。之前有文章报道称,RPA技术与末端荧光检测和胶体金侧流试纸条以及微流控芯片结合检测EGFR突变,但还没有类似ARSP肉眼观测法的应用。

  然而,ARSP法同样有待于进一步优化。比如,对于每一次EGFR检测来说,检测灵敏性和特异性都还有待提高;由于样本量有限,现仍需更多的临床样本实验进行验证。无论如何,在精准医疗大背景下,对于一些没有条件购买测序仪,以及不具备专业操作能力的不发达地区和国家,这种快速简便,操作简单的,无需任何仪器的ARSP基因检测法无疑为癌症基因检测提供有效参考,同时也为分子即时诊断领域(POCT)提供新的潜在解决方案。

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